고려대학교

목차

초록 i
ABSTRACT iii
목차 v
표 목차 vii
그림 목차 viii
기호 설명 x
1장. 서론 1
2장. 실험방법 및 재료 6
2.1 본 연구에서 사용된 시약 6
2.2 동물 세포 발현 벡터 구축 7
2.3 동물 세포 발현 및 정제 14
2.4 Size exclusion chromatography (SEC) 분석 14
2.5 마우스 면역화, 형질세포 분리 15
2.6 미세 유체 분석기를 활용한 단일 B세포 분리 및 페어링 VH–VL 유전자 합성 16
2.7 라이브러리 구축 및 FACS를 활용한 스크리닝 16
2.8 형광 탐침 제작 17
2.9 TIGIT 표적 항체의 항원 결합 능력 검증 ELISA 분석 18
2.10 TIGIT 표적 항체의 PVR 경쟁 능력 검증 ELISA 분석 18
2.11 마우스 항체의 인간화 19
2.12 In silico 기반 immunogenicity 예측 19
2.13 BLI (Biolayer Interferometry) 20
3장. 결과 21
3.1 재조합 TIGIT 단백질들의 발현 및 정제 21
3.2 마우스 면역화를 통한 항원 특이적 형질세포 분화 유도 21
3.3 드롭렛 기반 미세 유체 기술을 활용한 페어링 VH–VL 프래그먼트 증폭 및 라이브러리 제작 23
3.4 효모 세포 Fab 디스플레이를 통한 고속 스크리닝 26
3.5 마우스 항체의 항원 결합력 및 PVR과의 경쟁능력 검증 28
3.6 마우스 항체의 인간화 30
3.7 마우스 항체의 항원 결합력 및 PVR과의 경쟁능력 검증 32
3.8 인간 FR 도입 항체들의 in silico 기반 면역원성 분석 33
3.9 TIGIT 표적 항체들의 정량적 결합 상수 분석 35
4장. 결론 37
5장. 참고문헌 42