Postpartum hormonal change in cervical excision-induced preterm delivery
자궁경부결손으로 유도된 조산모 델에서의 산후 호르몬 변화
- 주제(키워드) Preterm birth , Cervical excision , inflammation , progesterone , estrogen , extracellular matrix (ECM)
- 발행기관 고려대학교 대학원
- 지도교수 홍순철
- 발행년도 2018
- 학위수여년월 2018. 8
- 유형 Text
- 학위구분 석사
- 학과 대학원 의과학과
- 세부전공 의생명과학전공
- 원문페이지 44 p
- 실제URI http://www.dcollection.net/handler/korea/000000081286
- UCI I804:11009-000000081286
- DOI 10.23186/korea.000000081286.11009.0000819
- 본문언어 영어
- 제출원본 000045953087
초록/요약
자궁경부결손으로 유도된 조산모델에서의 산후 호르몬 변화 조산은 임신 37 주 이전에 출산하는 것을 의미하며, 임신 여성의 약 5-18%가 조기진통으로 산과적 합병증이 발생한다. 주 산기 사망률의 75%를 차지하며, 조산으로 태어난 태아는 여러 합병증의 위험이 있다. 조산의 원인은 여러가지가 있는데, 우리는 Cervical disease 에 중점을 두었다. 우리는 이전 연구를 통해 독창적인 조산 동물 모델을 형성하였는데, 자궁경부를 절제한 후 임신한 마우스에 LPS 를 주사하면 조산율이 매우 높았다. 또한, 조산아는 정상아보다 키와 몸무게가 낮았고, 사망률이 높았다. 조산이 일어난 군의 Cervix 의 Muscle/collagen ratio 는 Proximal portion 에서 Sham 군에 비해 높았다. 임신 중 Cervix 의 Muscle 과 Collagen 이 재조직화되는 Ripening 과 Softening 에는 여러 물질이 작용하는데 그 중에서도 Steroid hormone 은 생식기관에서 가장 중요한 역할을 한다. 따라서, 본 연구의 목적은 우리의 조산모델에서 Muscle portion 이 증가한 사실과 호르몬의 관계에 대해 보기 위해, 자궁경부결손으로 조산이 유도된 모델에서의 산후 호르몬 변화를 관찰하였다. 5 주령의 C57BL/6 mice 를 이용하여 질을 통한 자궁경부의 절제술을 하였다. 수술 후 3 주간의 회복기간을 거쳐 Mating 을 진행한 후, 다음 날 Plug 가 체크되면 ‘Day1’로 간주한다. 임신 16 일이 되는 날 복부를 절개하고 자궁 오른쪽의 첫 번째와 두 번째 태낭 사이에 Normal saline, LPS 를 주사한다. 조직은 출산이 일어나면 채취한다. 실험 결과 조산군의 Proximal cervix 의 smooth muscle layer 에서 Estrogen receptor(ER) α 의 발현이 Sham 군에 비해 Ex+LPS 군에서 증가하였으며, Progesterone receptor (PR)의 발현은 LPS, Ex+LPS 군이 Sham 군에 비해 유의하게 증가하였다. 모체 혈청에서는 Ex, Ex+LPS 군에서 Estrone 이 Sham 군에 비해 감소하였고, Progesterone 은 Sham 군을 제외한 모든 군에서 양이 감소하였다. 조산군에서 ERα 와 PR 이 증가하고, 모체 혈청에서 Estrone 이 감소하여 지속적인 수축이 일어나는데 이것은 ‘muscle fatigue’를 일으킨다. 이것의 결과로 일어난 자궁경부 무력증은 자궁경부가 결손 된 모델에서 효과가 더 극대화 됐을 것이며, 이를 통해 조산이 일어났을 것이라고 생각된다. 우리는 본 실험을 통해 자궁경부 결손으로 조산된 동물모델을 이용하여 산후 호르몬의 변화를 입증하였다.
more초록/요약
Preterm birth is delivery before 37 weeks of gestation, and about 5 to 18% of pregnant women develop premature labor. There are many causes of preterm birth, but in our lab cervical factor is our focus. In our previous study, all of the groups that had cervical excision and LPS injection showed highest preterm birth rate. The muscle/collagen ratio of the cervix in the preterm group was significantly increased in the proximal portion. Many substances play a role in the ripening and softening of cervix in which muscle and collagen are reorganized, among which sex hormone plays a major role. Changes in hormone levels and receptors in our preterm model are unknown. Progesterone and estrogen play important roles in labor and the interaction of PR and ER systems plays an important role in regulating human labor. Therefore, the purpose of this study is to identify the role of sex hormones and their receptors in preterm birth using this model. We used sexually mature female C57BL/6 mice. The mating was performed 3 weeks after cervix excision. Gestational period was calculated by setting "mucus plug detection day" to day 1. On day 16 of gestation C57BL/6 mice received intrauterine lipopolysaccharide (LPS, 100㎍/100㎕ per mouse) or Normal saline (100㎕) via laparotomy. The uterine cervix was collected immediately after delivery. Estrogen receptor alpha (ERα), estrogen receptor beta (ERβ) and progesterone receptor (PR) expressions of the proximal and distal cervicies were evaluated using immunohistochemistry. The immunostain score was graded from 0 to 3 according to the degree of expression. The mRNA and protein expression of ER and PR in the cervix were analyzed by qPT-PCR and western blotting, respectively. The level of sex steroid hormone in maternal serum were measured using ELISA. All data were statistically analyzed by SPSS software. In the IHC scoring, the expression of ERα was significantly increased in smooth muscle layer (SML) of proximal cervix compared to sham group, and the expression of PR was significantly increased in LPS and Ex + LPS groups. In contrast, mRNA expression of PR in the cervix was decreased in all experimental groups. In the maternal serum, estrone (E1) and progesterone (P4) were decreased in Ex group and Ex + LPS group compared to sham group. In conclusion, We observed that ER α and PR increased in postpartum period at the smooth muscle layer of proximal cervix in the preterm model. When ER α and PR expression are increased and progesterone withdrawal, muscle contraction is prolonged, then muscle fatigue occurs. So, early dilation of the proximal cervix may cause preterm birth in our cervical excision mouse model.
more목차
CONTENTS 1
ABSTRACT 5
Ⅰ.INTRODUCTION 8
Ⅱ. MATERIALS AND METHODS 10
1. Animal model and treatment 10
2. Tissue collection 11
3. Immunohistochemistry and scoring 12
4. RNA extraction, cDNA synthesis and real-time quantitative PCR (qRT-PCR ) 12
5. Protein extraction and Western blotting 14
6. Serum hormone quantification 16
7. Statistical analysis 16
Ⅲ. RESULTS 17
1. mRNA gene expression 17
2. Protein level of ER, PR 17
3. Localization and expression level of ER, PR receptor 18
4. maternal serum level of estrogen and progesterone 19
Ⅳ.DISCUSSION 20
Ⅴ. REFERENCES 32
국문초록 37
ACKNOWLEDGEMENTS 39
