Analysis of miRNAs Expression In Lung Cancer Cells Using Capillary Electrophoresis with Laser-Induced Fluorescence
- 주제(키워드) microRNA , Capillary electrophoresis , Lung cancer
- 발행기관 고려대학교 대학원
- 지도교수 백자현
- 발행년도 2014
- 학위수여년월 2014. 8
- 학위구분 석사
- 학과 일반대학원 생명과학과
- 세부전공 분자생물학 전공
- 원문페이지 64 p
- 실제URI http://www.dcollection.net/handler/korea/000000051896
- 본문언어 영어
- 제출원본 000045808820
초록/요약
마이크로RNA는 세포의 발생과 분화 그리고 세포 예정사와 같은 생물학적 과정에서 매우 중요한 역할을 하는 것이 밝혀졌다. 세포에서 마이크로RNA의 발현 레벨의 차이는 암을 포함한 다양한 질병에 연관되어있다. 그러므로, 마이크로RNA의 레벨을 결정하는 것은 마이크로RNA 기능연구 또는 질병진단에서 중요하다. 하지만 생물학적인 시료에서 마이크로RNA는 대부분의 경우, 극 미량으로 존재하기 때문에 검출하기가 쉽지 않다. 이러한 이유로 생물학적 시료에서 마이크로RNA의 검출을 하기 위해서 많은 분석적 방법과 추출 방법들은 계속 개발되고 있다. 현재, 많은 검출방법들은 생물학적 시료에서 마이크로RNA를 추출하고 난 후 혼성화를 기반으로 한다. 그러므로, 이런 혼성화나 추출 효율은 생물학적 시료에서 마이크로RNA의 검출하는데 직접적으로 연관되어 있다. 이 연구에서, 우리는 세포에서 마이크로RNA 검출을 위하여 추출방법과 혼성화 조건을 정하는데 형광 검출기를 포함한 모세관 전기영동법을 사용하였고, 1% TX-100, 0.1mM EDTA, 50mM KCl을 포함하는 50mM Tris-Ac (pH 8.0) 버퍼에서 혼성화를 진행하였을 때, 혼성화된 마이크로RNA에서 가장 높은 형광강도를 갖는 것을 관찰하였다. 아울러, 세포에서 마이크로RNA의 추출 수율은 TRIzol 시약에 TX-100을 첨가하여 사용한 것이 TRIzol 시약만 사용했을 때보다 약 1.9배 더 높았다. 폐암 세포의 바이오마커 후보인 마이크로RNA-23a와 마이크로RNA-24의 발현 량을 프로파일링하였다. 그 결과 H1703 세포를 포함한 폐암세포에서 매우 높게 발현되는 것을 확인하였으며 이들의 발현을 저해하면 폐암세포의 성장이 억제되는 것을 확인하였다. 이 결과를 통해, 마이크로RNA-23a와 마이크로RNA-24는 폐암의 진단 그리고 치료제로써 유용한 마커가 될 수 있음을 알 수 있었다.
more목차
1. Introduction -----------------------------------------1
2. Materials and Methods ------------------------------7
2.1 Chemicals and materials ------------------------- 7
2.2 Cell culture-------------------------------------- 9
2.3 miRNA extraction-------------------------------- 9
2.4 Hybridization conditions--------------------------10
2.5 Capillary electrophoresis-------------------------10
2.6 Bioanalyzer------------------------------------- 11
2.7 MTT assay------------------------------------- 12
3. Results-------------------------------------------- 13
3.1 Detection of miRNA------------------------------- 13
3.1.1 Optimization of hybridization conditions of miRNA
and DNA probe-------------------------------- 13
3.1.2 Specificity of miRNA--------------------------- 19
3.1.3 Detection of miRNA-21 in A549 cell line---------- 22
3.2 Efficiency of miRNA extraction-------------------- 25
3.2.1 Optimization of TX-100 treatment conditions-----25
3.2.2 The effect of TX-100 at total RNA extraction using
TRIzol reagent-------------------------------- 30
3.3 Functional studies of miRNA--------------------- 37
3.3.1 miRNA-23a and miRNA-24 are upregulated in
lung cancer---------------------------------- 37
3.3.2 Effects of miRNA inhibitors on cell viabilities---- 41
4. Discussion----------------------------------------- 43
References------------------------------------------- 47
Abstract in Korean-------------------------------------52
